Loading

SÜSPANSE HÜCRE KÜLTÜRÜ



Bugün sizlere süspanse hücre kültürünü anlatacğım. Öncelikle hücrelerimiz K562 ve sağlıklı hücreler. K562,kronik myeloid lösemi hücre hattıdır. Hücreler süspansedir ve yuvarlaktır. Bcr/abl füzyon geni için pozitiftir ve hem farklılaşmanın granülositlere  hem de eritrositleri proteomik olarak benzerlik taşımaktadır. Bu hücreler adeziv/adherent hücre olmdıkları için tripsine ihtiyaç duymadan herhangi bir kimyasal ve fiziksel etkiye bağlı kalmadan kolayca 50ml falcın tüplerimize aktarıyoruz. 


-1200rpm 5dk santrifüjlüyoruz daha sonra süpernatant atılır, Pelet kısmı daha iyi kalkması için pıt pıtlanır.


-Hücrelern olduğu 50ml falcon tüplerine 1 ml veya peletin durumuna göre 2-3 ml %10 RPMI (ortam ) ekliyoruz. İyice pipetaj yapıyoruz hücreler eşit bir şekilde dağılmasını sağlıyoruz


- hücre sayımına geçiyoruz hücreleri 96 well plate bir kuyucuğuna 50ul hücre+50ul tripan blue ekliyoruz. Hücrelerimizi ışıklı mikroskop altında thoma lamında sayıyoruz 


N x DF x 10.000 =1 ml deki hücre sayısını vermektedir.

Süspanse hücrelerde, dilüsyon sayısı 2 olarak alıyoruz. 


Hücre sayımı bitikten sonra, kaç ul hücre koyacaksak hesaplayıp flasklara ekliyoruz. Daha önce flasklarımıza 10 ml  (25cm2 flasklar için, yüzey alanını kapladığı kadar ) ortam ekliyoruz. Hücrelerimiz artık hazır ! Hücrelerimizi hemen inkübatöre kaldırıyoruz 


Yorumlar

Yorum Gönder

ΔΔCt Hesaplama

ΔΔCt Hesaplama











ΔΔCt Sonucu:

Bu blogdaki popüler yayınlar

MİTOKONDRİ’NİN GENOMU ve GÖREVLERİ

Resim
 Rabia YALÇIN  - Moleküler Biyoloji ve Genetik,  Haliç Üniversitesi Mitokondri, tüm ökaryot hücrelerde yer alan ve hücrede meydana gelen kimyasal reaksiyonlar için gerekli enerjiyi sağlayan, sitoplazmada bulunan bir organeldir. Mitokondriler oval görünümlü, yaklaşık 1 µM uzunluğa ve 0,5 µM ene sahiptirler. Enerjiyi, hücrenin sitoplazmasındaki besin maddelerinden ve oksijenden sağlamaktadırlar. Oksidatif fosforilasyonun merkezidir. Mitokondri’nin yapısını incelediğimizde çift katlı iç ve dış membranı, zarlar arası boşluk, DNA, matrixler, ribozomlardan ve kristalardan oluşmaktadır. Bir hücre içerisinde yüzlerce, binlerce mitokondri bulunabilir ve şekil, büyüklük olarak farklılık göstermektedir. Birkaç yüz mikron çapında küresel yapıda ya da birkaç mikron çapında ipliksi görünümde olabilmektedirler. Bütün mitokondri’lerin içerisinde 2-10 arasında değişen mitokondriyal DNA bulunmaktadır. Fakat bu değişkenlik türden türe, kişiye, dokuya göre değişmektedir. İnsanlarda 16 kb, bitkilerde ise 5
Devamı

Soy Ağaçları

Resim
  Doğa Bahçeci - Moleküler Biyoloji ve Genetik,  Doğu Akdeniz Üniversitesi, Kıbrıs Tanımı               Soy ağaçları biyolojide belirli semboller ile aile geçmişini anlatan diyagramlardır. Bir soyağacı, aile üyeleri arasındaki ilişkileri gösterir ve bir aile içinde hangi bireylerin belirli genetik patojenik varyantlara, özelliklere ve hastalıklara sahip olduğunu ve ayrıca yaşamsal durumu gösterir. Bir aile içindeki hastalık kalıtım kalıplarını belirlemek için bir soyağacı kullanılabilir [1].               Bir özelliğin kalıtsal olup olmadığını belirlemek için genellikle en az üç nesil soy ağacına dahil edilir. Bu bilgiyi kullanarak, belirli bir bireyin bu özelliğe sahip olma veya çocuklarına aktarma şansını söyleyebiliriz. Bir soyağacına bakıp anlayabilmemiz için soyağacı çizmenin standart yolları vardır [2].   Soy Ağacı İsimlendirmesi Şekil 1: Soy Ağacı Sembolleri [1].   Soy ağaçlarında erkekleri temsil etmek için kareler ve kadınları temsil etmek için daireler
Devamı

JAK-STAT Sinyal Yolağı

Resim
 JAK-STAT sinyal yolu, bir hücredeki proteinler arasındaki bir etkileşimler zinciridir ve bağışıklık, hücre bölünmesi, hücre ölümü ve tümör oluşumu gibi süreçlerde yer alır. Yol, bir hücrenin dışındaki kimyasal sinyallerden hücre çekirdeğine bilgi iletir, bu da transkripsiyon adı verilen bir süreç yoluyla genlerin aktivasyonu ile sonuçlanır. JAK-STAT sinyallemesinin üç anahtar parçası vardır: Janus kinazlar (JAK'ler), sinyal dönüştürücü ve transkripsiyon proteinlerinin (STAT'ler) aktivatörü ve reseptörler (kimyasal sinyalleri bağlayan). Bozulmuş JAK-STAT sinyali, cilt rahatsızlıkları, kanserler ve bağışıklık sistemini etkileyen bozukluklar gibi çeşitli hastalıklara yol açabilir. JAK'ların ve STAT'lerin Yapısı Dört JAK proteini vardır: JAK1, JAK2, JAK3 ve TYK2.[1] JAK'lar bir FERM alanı (yaklaşık 400 kalıntı), SH2 ile ilgili bir alan (yaklaşık 100 kalıntı), bir kinaz alanı (yaklaşık 250 kalıntı) ve bir psödokinaz alanı (yaklaşık 300 kalıntı) içerir. Kinaz alanı, JAK&
Devamı